Jodek propidium | |
Identyfikacja | |
---|---|
Nazwa IUPAC | Dijodek 3,8-diamino-5- [3- (dietylometyloamonio) propylo] -6-fenylofenantrydyniowy |
N O CAS | |
N O ECHA | 100,042,786 |
N O WE | 247-081-0 |
PubChem | 424898 |
UŚMIECHY |
c1cc2c (c3ccccc3) [n +] (CCC [N +] (CC) (CC) C) c3c (c2cc1) ccc (N) c3. [IH -]. [IH-] , |
InChI |
InChI: InChI = 1 / C27H33N4.2HI / c1-4-31 (3,5-2) 17-9-16-30-26-19-22 (29) 13-15-24 (26) 23- 14-12-21 (28) 18-25 (23) 27 (30) 20-10-7-6-8-11-20 ;; / h6-8,10-15,18-19,29H, 4- 5,9,16-17,28H2,1-3H3; 2 * 1H / q + 1 ;; / p-1 |
Wygląd | ciało stałe: ciemnoczerwone; w roztworze: od ciemnoczerwonego do pomarańczowego w zależności od stężenia. |
Właściwości chemiczne | |
Brute formula |
C 27 H 34 I 2 N 4 [Izomery] |
Masa cząsteczkowa | 668,3946 ± 0,0248 g / mol C 48,52%, H 5,13%, I 37,97%, N 8,38%, |
Właściwości fizyczne | |
T ° fuzja | 210 do 230 ° C (rozkład) |
Właściwości optyczne | |
Fluorescencja | Wzbudzenie X 305 nm i 538 nm ; Emisja λ 617 nm |
Środki ostrożności | |
Dyrektywa 67/548 / EWG | |
Xi Klasyfikacja : mutagenny, drażniący, podejrzewany czynnik rakotwórczy Symbole : Xi : Produkt drażniący Zwroty R : R36 / 37/38 : Działa drażniąco na oczy, drogi oddechowe i skórę. Zwroty S : S26 : Zanieczyszczone oczy przemyć natychmiast dużą ilością wody i zasięgnąć porady lekarza. Zwroty R : 36/37/38, Zwroty S : 26, |
|
Ekotoksykologia | |
DL 50 | 16 mg · kg -1 (mysz, sc ) |
Jednostki SI i STP, chyba że określono inaczej. | |
Jodek propidyny (IP, w języku angielskim jodkiem propidyny , PI) jest czynnikiem interkalującym kwasy nukleinowe (the DNA lub RNA) i cząsteczki fluorescencyjne o masie cząsteczkowej 668.403 Da . Jodek propidyny jest powszechnie stosowany jako marker DNA do oznaczania jąder komórek, które utraciły integralność błony (charakterystyczne zjawisko martwicy ).
Podobnie jak bromek etydyny (BEt), jodek propidyny (PI) jest środkiem interkalującym używanym jako marker kwasów nukleinowych. Wiąże się z zasadami DNA z niewielką lub żadną specyficznością sekwencji i po stechiometrii jednej cząsteczki dla 4-5 par zasad. PI może również wiązać się z RNA ; z tego powodu leczenie przy użyciu nukleaz ( RNaz ) jest konieczne w celu degradacji RNA, a tym samym uniknięcia fałszywie dodatnich wyników. Z drugiej strony cząsteczka PI wiążąca kwas nukleinowy jest 20 do 30 razy bardziej fluorescencyjna niż wolna cząsteczka w roztworze, przy czym maksimum wzbudzenia jest przesunięte o około 30 do 40 nm w kierunku czerwieni, a maksimum emisji przesunięte o około 15 nm. w kierunku błękitu. Adres IP jest stosowany w obrazowaniu komórkowej ( mikroskopii fluorescencyjnej , konfokalnej mikroskopii ), za pomocą cytometrii przepływowej lub fluorometrycznie .
Jego zastosowanie głównie w obrazowaniu komórek i cytometrii przepływowej tłumaczy się względną lipofobią. W rzeczywistości, w przeciwieństwie do bromku etydyny, który ma zdolność stosunkowo łatwego przenikania przez błony plazmatyczne, PI przez swój drugi czwartorzędowy związek amoniowy ma stosunkowo wyższą lipofobię (lub hydrofilowość). To sprawia, że jest to potężny marker żywotności komórki: w rzeczywistości żywa komórka ma integralność błony, a PI nie jest wtedy w stanie przeniknąć i związać się z DNA obecnym w komórce, w przeciwieństwie do martwej komórki, której przepuszczalna błona będzie w stanie przepuścić PI, który będzie wiązał się z DNA.
Ponadto PI można stosować równolegle z innymi markerami fluorescencyjnymi (techniki wielokrotnego znakowania). Zatem PI jest kompatybilny z bezpośrednim lub pośrednim znakowaniem przez przeciwciało, ze znakowaniem w hybrydyzacji in situ lub nawet ze znakowaniem przy użyciu specyficznych fluoroforów dla struktur komórkowych.
W cytometrii przepływowej stosuje się marker fluorochromowy: aneksyna V-FITC oznacza komórki w fazie apoptozy. Podczas tego zjawiska komórki odsłaniają na zewnętrznej powierzchni błony komórkowej pewne fosfatydyle, między innymi fosfatydyloserynę, która normalnie znajduje się na wewnętrznej powierzchni błony komórkowej (co pozwala innym komórkom wiedzieć, które komórki są w fazie apoptozy). Dlatego też aneksyna V-FITC wiąże się z fosfatydyloserynami, umożliwiając w ten sposób różnicowanie komórek apoptotycznych od żywych. Jednak podczas martwicy błona plazmatyczna komórki częściowo eksploduje, staje się porowata, a komórka w ten sposób wystawia swoje fosfatydyloseryny na działanie środowiska zewnętrznego. Nekrotyczna komórka jest zatem również oznaczana przez aneksynę V-FITC. Następnie przeprowadza się drugie znakowanie jodkiem propidyny, który wiąże komórki tylko wtedy, gdy błona plazmatyczna jest porowata. Innymi słowy, PI może wiązać się z nekrotycznymi komórkami (z powodu porowatej błony), ale nie z komórkami apoptotycznymi (z powodu nieporowatej błony). W ten sposób uzyskuje się następujące wyniki w cytometrii płynów x:
Jedno z zastosowań PI w biologii roślin dotyczy znakowania ścian komórkowych. Rzeczywiście, po znakowaniu IP można zaobserwować zarys komórek, IP pozostające wokół komórek w ścianie obserwowanej tkanki roślinnej. Można więc na przykład obserwować pod mikroskopem konfokalnym zarys komórek tkanki korzeniowej nasion Arabidopsis thaliana . Możliwe jest wtedy precyzyjne zlokalizowanie, w której części korzenia może zachodzić ekspresja genu będącego przedmiotem zainteresowania, jeśli ten ostatni został połączony z genem kodującym GFP .
Chociaż żaden arkusz nie został jeszcze opublikowany przez INRS na temat PI, jest to produkt szkodliwy. Należy obchodzić się z nim ostrożnie i chociaż jego względna lipofobia ogranicza jego szybkie wnikanie do tkanek, użycie rękawiczek lateksowych lub nawet nitrylowych jest niezbędne.