Odczynnik Griessa

Odczynnik Griessa jest odczynnik szeroko stosowane w celu określenia mikroorganizmów mających enzymu reduktazy azotanowej (zwane „azotan +”) i te, które nie mają (zwane „azotan -” lub „azotan ++”).

Sposób działania

Odczynnik Griessa reaguje z jonem azotynowym (NO 2 - ), tworząc czerwony barwnik.

Składa się z dwóch odczynników. Jon azotynowy tworzy z kwasem sulfanilowym (odczynnik 1) sól diazoniową . Sól ta uwidacznia się na czerwono po dodaniu α-naftyloaminy (odczynnik 2).

Aby określić, czy bakteria ma reduktazę azotanową, hoduje się ją w bulionie hodowlanym, zwanym bulionem azotanowym , zawierającym jony azotanowe , ale pozbawionym azotynów. Po wystarczającej inkubacji (zwykle 24 godziny w bakteriologii medycznej), dodaje się kroplę odczynnika 1 i jednego odczynnika 2. Jeśli pojawi się czerwony kolor, bakterie zredukowały całość lub część azotanu do azotynu. Jest to zatem „azotan +”.

Jeśli nie pojawia się zabarwienie, w bulionie nie ma azotynów, ale może to wynikać z dwóch powodów:

• bakterie nie mają reduktazy azotanowej;
• posiada ponadto reduktazę azotynową, która przekształciła wszystkie azotyny w azot , gdy tylko się pojawiły.

Aby rozróżnić te dwa przypadki, istnieją dwie możliwości:

• najczęściej dodaje się kilka kawałków proszku cynkowego . Ten bardzo redukujący proszek redukuje azotany (jeśli jakiekolwiek pozostają w bulionie) w ciągu kilku minut do azotynów i pojawia się czerwony kolor. Bakteria była zatem „azotanem -”. Jeśli nie pojawia się zabarwienie, w bulionie nie ma już azotanów, dlatego bakteria to azotan + (i redukuje azotyny do azotu);
• do bulionu hodowlanego można również włożyć (bezpośrednio przed inokulacją) szklany dzwonek, który wyłapuje i wizualizuje powstający gaz. Jeśli utworzył się gaz, wydzielił się azot. W tym przypadku oczywiście potrzebujesz bulionu pozbawionego węglowodanów (w przypadku bulionu azotowanego ), ponieważ gazem byłby azot lub CO 2 powstały w wyniku katabolizmu węglowodanów, bez możliwości rozróżnienia tych dwóch przypadków.

Mówi się, że azotany + bakterie "oddychają" azotanami, ponieważ wykorzystują tlen, który uwalniają z azotanu, tak jak używają tlenu z powietrza.

Link zewnętrzny

• G. Toupance, A. Person i in. , Gazowe zanieczyszczenie atmosfery - Pomiar gazów , rozdz.  Ręczna metoda chemiczna Griessa i Saltzmana , Engineering Technical Editions , P 4031-3.