Metodą biuretową jest metodą kolorymetryczną oznaczania z białkami .
W środowisku zasadowym białka z co najmniej 4 wiązaniami peptydowymi tworzą z jonami miedzi II (Cu 2+ ) kompleks niebiesko-fioletowy, którego intensywność koloru jest proporcjonalna do stężenia białka. To zabarwienie zmienia się również w zależności od charakteru oznaczanych białek, zasadowości podłoża, stężenia siarczanu miedzi i temperatury. W związku z tym możliwy jest test kolorymetryczny przy 540 nm . Użyty odczynnik barwiący to odczynnik Gornalla, składający się z:
Protokół, według którego należy postępować przy przeprowadzaniu testu metodą biuretową, jest następujący: zmieszać 3 ml odczynnika Gornalla z 2 ml różnych roztworów białek o znanych stężeniach. Następnie inkubuj w temperaturze 37 ° C przez 10 min w ciemności. Pozostawić do ostygnięcia, a następnie zmierzyć absorbancje roztworów przy 540 nm. Umożliwia to uzyskanie standardowego zakresu i wykreślenie krzywej standardowej w celu określenia stężenia białka w nieznanym roztworze traktowanym w ten sam sposób.
Metodę tę można zastosować do testu jakościowego, który może być ilościowy, jeśli dostępne są czyste roztwory białek. Jest to jakościowe, ponieważ maksymalna absorpcja zabarwienia zmienia się wraz z liczbą wiązań peptydowych obecnych w cząsteczce. Ma charakter ilościowy, ponieważ intensywność wchłaniania jest proporcjonalna do stężenia białka.
Wreszcie jest stosunkowo szybki i niedrogi w porównaniu z metodą Kjeldahla, która wymaga wcześniejszej mineralizacji białek.
Ta metoda ma wysoki próg ilościowy (0,6 mg na litr) i dlatego wymaga, aby badany roztwór był wystarczająco stężony. Ponadto ta specyficzna reakcja polipeptydów może również wystąpić z tripeptydami i zniekształcić pomiary. Nie można go również stosować do oznaczania glikoprotein. Wreszcie obecność amoniaku w nieznanym roztworze może zakłócać reakcję, tworząc kompleksy z miedzią i zniekształcać wyniki.
Aby uzyskać stabilne zabarwienie, niezbędny jest czas reakcji około 30 minut w ciemności. Odczyt jest spektrofotometryczny , konieczne jest jednak wykonanie zakresu kalibracji oraz odpowiednich wskaźników kompensacji.