Techniki biologii molekularnej

Główne techniki powszechnie stosowane w biologii molekularnej :

Elektroforeza

Elektroforeza żelowa : technika ta umożliwia rozdzielenie cząsteczek według ich wielkości (zwanej masą cząsteczkową), powodując ich migrację przez żel pod wpływem pola elektrycznego. Prąd napędza cząsteczki, a siatki żelu je hamują. Ich migracja zależy zatem zarówno od ich wielkości, ale także od stężenia żelu; pójdą jeszcze dalej, ponieważ są małe, a żel mniej skoncentrowany. Technika ta może być stosowana do oddzielania DNA , RNA ( żele agarozowe lub akrylamidowe ) lub białek (żel akrylamidowy).
Elektroforeza w żelu z gradientem denaturującym .
Elektroforeza kapilarna : wariant elektroforezy stosowany do sekwencjonowania DNA.

Trawienie enzymatyczne (trawienie restrykcyjne ): technika wykorzystująca enzymy restrykcyjne do specyficznego cięcia cząsteczki DNA w celu manipulowania nią lub klonowania.

Miniprep lub miniprep: technika ekstrakcji niewielkiej ilości plazmidowego DNA z transformowanych bakterii .

W zależności od pożądanej ilości DNA stosuje się również preparaty midi lub maxi.

Klonowanie : technika polegająca na wyizolowaniu fragmentu DNA i jego identycznym pomnożeniu poprzez „wstawienie” go do „nośnika” cząsteczki DNA zwanej wektorem umożliwiającej jego amplifikację i ostatecznie otrzymujemy rekombinowaną cząsteczkę DNA

Mutageneza ukierunkowana na miejsce : techniki, które umożliwiają precyzyjną i punktualną modyfikację podstaw genomu.

Reakcja łańcuchowa polimerazy : reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR). Technika ta służy do amplifikacji DNA, czyli uzyskania dużej ilości kopii danej sekwencji nukleotydowej.

RT-PCR może mieć dwa różne znaczenia:
- PCR w czasie rzeczywistym PCR w czasie rzeczywistym.
- Odwrotna transkrypcja : odwrotna transkryptaza PCR. Ta technika jest kombinacja odwrotnej transkrypcji wystąpienia RNA i z PCR i pozwalające na klonowanie fazy kodującej gen lub ilościowego poziomu jego transkrypcji (ilość RNA jest obecny).

Losowa amplifikacja polimorfizmu DNA : Losowa amplifikacja polimorficznego DNA (RAPD). Technika losowej amplifikacji umożliwiająca porównanie genomowego DNA.

Sekwencjonowanie DNA : technika określania kolejności nukleotydów fragmentu plazmidu lub genomowego DNA .

Różne metody sekwencjonowania:

- Metoda chemiczna lub metoda Maxama i Gilberta;
- Metoda enzymatyczna lub metoda Sangera.
- pirosekwencjonowanie

Southern blotting : technika wykorzystująca elektroforezę żelową i umożliwiająca wykrycie określonych sekwencji DNA. Często stosowany w biologii molekularnej do wykrywania liczby kopii transgenów wprowadzonych do genomu komórki lub organizmu zmodyfikowanej genetycznie.

Northern blot : technika pochodząca z Southern blotting stosowana do wykrywania i ilościowego oznaczania danego typu RNA.

Znakowania kwasów nukleinowych .
Transformacja lub transgeneza genetyczna : technika polegająca na wprowadzeniu jednego lub więcej genów do komórek (np. Roślinnych, zwierzęcych, bakteryjnych) prowadząca do przeniesienia wprowadzonego genu lub transgenu do kolejnych pokoleń.
Polimorfizm długości fragmentu restrykcyjnego (RFLP lub): Badanie techniczne polimorfizmu genetycznego u podstawy „DNA” i „rybotypowania”.
Hybrydyzacji fluorescencyjnej in situ (angielski fluorescencyjna hybrydyzacja in situ lub FISH)
Prosta hybryda
Podwójna hybryda
Test komplementacji białka PCA

Western blot : technika pochodząca z Southern blotting, stosowana do wykrywania i oznaczania ilościowego danego typu białka.
Sekwencjonowanie białek : technika definiowania kolejności aminokwasów w sekwencji polipeptydowej.
Metoda TAP lub TAP-TAG, technika oczyszczania kompleksu białkowego.