Marker fluorescencyjny w PCR

Wiele markerów fluorescencyjnych jest stosowanych w PCR ( reakcja łańcuchowa polimerazy ).

Historyczny

Dla jasności podane daty odpowiadają pierwszej publikacji z tej dziedziny i przytacza się tylko pierwszych autorów, przy czym pełne odniesienia znajdują się w rozdziale „Bibliografia”.

• 1880  : Pierwsza syntetyczna pożywka hodowlana dla mikroorganizmów fluorescencyjnych firmy Hueppe F.
• 1964  : Wykrywanie przez fluorescencję DNA związanego z BET przez Lepecq JB.
• 1972  : Pierwsza migracja DNA na żelu do elektroforezy przez Aaij C.
• 1986  : Pierwsza publiczna publikacja na temat PCR autorstwa Kary Mullis (Nagroda Nobla w dziedzinie chemii w 1993).
• 1989  : Pierwsze wykrycie produktu PCR przy użyciu BET (a nie przez radioaktywność) przez Xu ZD.
• 1992  : Wynalezienie real-time PCR przez Higuchi R.
• 1994  : Opatentowanie SYBR Green I przez Molecular Probes.
• 1995  : Pierwsze użycie SYBR green do wykrywania produktu PCR przez Schneeberger C.
• 1995  : Wynalezienie sond do hydrolizy przez Livak KJ.

Niespecyficzne markery

Interkalanty DNA

Drobne znaczniki rowków

cyjanidryny asymetryczne

Specyficzne markery sekwencji

Sondy hybrydyzacyjne

Sondy do hydrolizy

Sonda jest skonstruowana przy użyciu donora ( fluoresceiny , której długość fali wzbudzenia wynosi 530 nm) i „wygaszacza”, wszczepionego na polinukleotyd komplementarny do interesującej sekwencji DNA.

Sondy Molecular Beacons

Skorpiony sondy

Bibliografia

Bibliografia francuska

• Hueppe F. Badania nad niebieskim mlekiem. Beiträge zur Biologie der Pflanzen Cohna. 1880; 3

• Lepecq JB, Yot P, Paoletti C. Interakcje między bromowodorkiem etydyny (BET) i kwasami nukleinowymi (AN). Badanie spektrofluorometryczne. [Interakcja bromhydratu etydyny (BET) z kwasami nukleinowymi (NA). Badanie spektrofluorymetryczne.] CR Hebd Seances Acad Sci. 1964; 259: 1786-9.

• Poitras E, Houde A. Real-time PCR: zasady i zastosowania. Recenzje z biologii i biotechnologii (Kanada). 2002; 2 (2): 2-11

• Tsé C, Capeau J. Kwantyfikacja kwasów nukleinowych metodą ilościowej PCR w czasie rzeczywistym. Ann Biol Clin (Paryż). 2003; 61 (3): 279–93

Bibliografia angielska

• Aaij C, Borst P. Elektroforeza żelowa DNA. 1972. Biochim Biophys Acta. 10 maja; 269 (2): 192-200.

• Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Jednoczesna amplifikacja i wykrywanie określonych sekwencji DNA. 1992. Biotechnologia; 10: 413–7.

• Livak KJ, Flood JA, Marmaro J, Giusti W, Deetz K. Oligonukleotydy z barwnikami fluorescencyjnymi na przeciwległych końcach zapewniają system wygaszonej sondy przydatny do wykrywania produktu PCR i hybrydyzacji kwasów nukleinowych. 1995. Metody PCR Zał. 4: 357-362.

• Mullis K, Faloona F, Scharf S, Saiki R, Horn G, Erlich H. Specyficzna amplifikacja enzymatyczna DNA in vitro: reakcja łańcuchowa polimerazy. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 1986; 51 P 1, 263-73.

• Schneeberger C, Speiser P, Kury F, Zeillinger R. Ilościowe wykrywanie produktów odwrotnej transkryptazy-PCR za pomocą nowego i wrażliwego barwienia DNA. 1995. Metody PCR Zał. 4 lutego: 234-8.

• Xu ZD, Yu YJ, Hsie AW, Caskey CT, Rossiter B, Gibbs RA. Badanie przesiewowe delecji w locus fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej w komórkach chomika chińskiego przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy. 1989. Teratog Carcinog Mutagen; 9 (3): 177-87.